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本试剂盒用于从哺乳动物组织或培养细胞中提取膜蛋白和胞质蛋白，提取制备过程简便。匀浆后的匀浆液经过低速离心去除未破碎的细胞和细胞核后的上清，再高速离心得到的上清中含有胞质蛋白，沉淀经过溶解后得到膜蛋白。制备的膜蛋白和胞质蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验Gel shift Assay)、免疫共沉淀、Western Blotting和酶活性测定等后续蛋白质研究。每次可以处理10⁷个细胞或100mg动物组织，可以使用50次。

• 提取的蛋白最大限度地保持活性，可以用于Pull Down，EMSA,IP，Enzyme Activity Assay等实验；
  
• 试剂盒内含有的蛋白酶和磷酸酶抑制剂可以避免蛋白质的酶解和蛋白质磷酸化状况被破坏；
  
• 整个实验过程只需要2个小时左右，无需要超速离心，可以并行处理多个样本；
  
• 即可以用于培养细胞(50×10⁷个)，也可以用于动物组织(50×100mg)蛋白质的提取。

• 所有的试剂及器具均需预冷后使用，以保证蛋白质的完整性，细胞或组织量需达到要求。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 由于不同蛋白质和不同的实验所需要的缓冲体系不同，提取后的蛋白质样品，如有必要可透析除去其它一些盐份。
  
• 可以使用(C500090)Sephadex重力型脱盐柱脱盐或将缓冲液替换为实验所需要的目的蛋白质的合适缓冲液。
  
• 对于提取膜蛋白质和胞质蛋白可以采用我司生产的非干扰型蛋白质浓度定量试剂盒(C503071)或改良型Lowry法蛋白浓度定量试剂盒(C504041)及改良型BCA法蛋白质浓度定量试剂盒(C503051)对提取样品中的蛋白质进行定量。
  
• 如果用于蛋白质质谱研究，请用我司生产的铜染(C510017)或锌染(C510019)或质谱用快速银染试剂盒(C500021)对胶上的蛋白质进行染色，这些染色方法对蛋白质没有修饰作用，所以对质谱图没有影响。对于一般的染色，可以采用无毒型考马氏亮蓝染色液(C503011)或高灵敏考马氏亮蓝染色液(C510041)或通用型蛋白染色液(C516024)进行染色。
  
• 使用后，请旋紧瓶盖防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
  
• 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。

• 对于悬浮培养的细胞或用细胞刮刮下的贴壁细胞，取培养细胞5×10⁶～1×10⁷个，将细胞及培养液移至离心管中，4℃，500g离心10min，弃去培养液，再向离心管中加入10mL预冷的1×PBS漂洗液，1000rpm离心5min，重复洗两次；
  
• 对于组织样本，将100mg组织剪切成小块，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，加入适量的预冷的1X PBS，4℃，700g(3000rpm)离心3min，弃掉上清，重复清洗两次；
  
• 向以上收集的细胞或组织中加入1mL预冷的Buffer A(使用前向每1mL的Buffer A中加入1μL DTT、10μL PMSF、1μL蛋白酶抑制剂和5μL磷酸酶抑制剂)，超声破碎细胞，每次30sec，3～4次，每次间隔1min，置于冰上冷却，超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％或将组织置玻璃匀浆器冰上均质30～50次至组织完全成匀质状液体无明显组织小块。
  
• 将匀浆液转移至预冷的离心管中，于4℃,1000g(4100rpm)离心10min，去除沉淀。
  
  • 沉淀中为未破碎的细胞，细胞核和一些细胞碎片.重复步骤4可以进一步去除上清中的杂质。
• 将上清转移至新的预冷离心管中，于4℃,18 000rpm离心60min，取上清转至新管中为胞质蛋白，冷冻保存。
  
  • 步骤5中的离心时间可以根据蛋白样品的分离效果进行缩短或延长，离心时间越长分离效果越显著。
• 在沉淀中加入500μL预冷的Buffer B(使用前向每1mL的Buffer B中加入1μL DTT，10μL PMSF，1μL蛋白酶抑制剂和5μL磷酸酶抑制剂)，涡旋振荡10sec，在冰上放置30min，期间取出振荡5～6次。
  
• 4℃，16000rpm，离心10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管中即得膜蛋白，分装并保存于-80℃，避免反复冻融。